MagVigen™ Saliva DNA Extraction Kit

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產(chǎn)品內(nèi)容

• MagVigen唾液DNA捕獲納米顆粒
• 唾液溶解緩沖液
• 蛋白酶K
• 蛋白酶K緩沖液
• 清洗緩沖液1原液
• 洗脫緩沖液

所需材料

• 異丙醇
• 乙醇
• 十二烷基硫酸鈉，16%
• 磁性架(NVIGEN目錄號A20006)

注意:
MagVigen唾液DNA捕獲試劑盒(K61009)可以從唾液樣本中捕獲DNA (>30bp)。

協(xié)議

1. 準備唾液樣本:如果使用冷凍唾液，在室溫下融化。將唾液以10000x離心10分鐘，以去除任何沉淀。




2. 制備裂解緩沖液:如果有固體，在60℃加熱幾分鐘，形成澄清溶液。




3. 制備蛋白酶溶液:向蛋白酶K小瓶中加入蛋白酶K緩沖液。渦旋混合均勻。儲存于-20°c




4. 準備清洗緩沖液1:根據(jù)表1計算所需的量。向每550 μl清洗緩沖液1儲備液中添加450 μl異丙醇。每次都要做緩沖。




5. 檢查表1中的試劑使用情況。




6. 將蛋白酶K溶液加入樣品管底部，將320 μl唾液樣品加入管中，將80μl 1x PBS加入管中。渦旋5秒鐘，以充分混合，短暫旋轉(zhuǎn)。




7. 向試管中加入16% SDS。渦旋5秒鐘，以充分混合，短暫旋轉(zhuǎn)。




8. 向試管中加入唾液溶解緩沖液。渦旋1分鐘以充分混合。短暫降速。在60°C的水浴中孵育30分鐘。




9. 添加MagVigen唾液DNA捕獲納米顆粒。輕輕搖動小瓶使其分散。然后加入異丙醇，渦旋混合均勻，短暫減速，并保持低速至中速渦旋45分鐘。




10. 將反應(yīng)管放在磁性架上，沉淀珠子，直到溶液澄清(大約10分鐘，取決于磁體的強度和樣品體積)。




11. 慢慢去除上層清液。注意不要拿走任何珠子，盡可能多地取出溶液。輕敲固體表面上的磁性架，使殘留溶液沉淀到試管底部，去除所有上清液。




12. 從磁鐵上取下試管，加入清洗緩沖液1。通過移液或渦旋混合。短暫降速。在磁性架上沉淀珠子(約10分鐘)，去除上清液。在表面上輕敲磁架。除去所有上清液。

    
    注意:

    不需要*全分散珠子。用移液器吸頭盡可能分散就可以了。




13. 使用80%的乙醇清洗珠子沉淀。不需要*全分散珠粒。稍微向前和向后傾斜磁性架，使樣本管留在磁性架上。然后短暫旋轉(zhuǎn)，使蓋子中沒有溶液殘留。在磁性架上沉淀珠子(約3分鐘)，并去除所有上清液。輕敲固體表面上的磁性架，將上清液殘渣沉淀到試管底部。除去所有上清液。




14. 使用80%乙醇再次清洗珠子沉淀。沉淀珠子(~ 2-3分鐘)并去除所有上清液。




15. 將試管留在磁性架上，風(fēng)干沉淀以蒸發(fā)所有乙醇。這需要2-3分鐘。




16. 向珠子中加入所需量的洗脫緩沖液，上下吸取，直到所有沉淀*全重新分散。將珠子分散在洗脫緩沖液中3分鐘。




17. 短暫降速。然后將試管放在磁性支架上5分鐘。




18. 在不干擾磁珠沉淀的情況下收集上清液。上清液含有提取的DNA。移出DNA溶液進行下游實驗時，將試管放在磁鐵旁邊。如果不立即使用，提取的DNA溶液可以儲存在-20℃下。

表1。每個步驟中使用的試劑體積。

MagVigen™ Saliva DNA Extraction Kit