Cytion 為細胞系培養(yǎng)提供全面的指南，強調(diào)無菌和無菌技術的重要性。我們的方案可確保在一系列細胞類型和應用中成功進行細胞培養(yǎng)。

1. 實驗室設計

設計組織培養(yǎng)實驗室需要周密的規(guī)劃，以確保在安全高效的環(huán)境中生產(chǎn)高質(zhì)量的材料。最佳設施包括用于檢疫和處理未受污染材料的不同區(qū)域，每個區(qū)域都有專用的培養(yǎng)箱。當空間不允許按區(qū)域分開時，建議在時間上分開處理不同的材料。嚴格的清潔方案和至少遵守 2 類密封水平對于最大限度地降低污染風險和維持受控的實驗室環(huán)境至關重要。

2. 建立無菌工作空間

• 引擎蓋實踐：通過正確定位引擎蓋窗扇并避免雜亂來保持層流氣流。

• 滅菌：移液器吸頭、玻璃移液器等高壓滅菌工具，并使用70%乙醇進行表面消毒。

3. 介質(zhì)和試劑制備

• 培養(yǎng)基選擇：查閱我們詳細的培養(yǎng)基圖表，將您的細胞系與適當?shù)?DMEM 或 RPMI 培養(yǎng)基相匹配，并輔以胎牛血清 (FBS) 和谷氨酰胺等添加劑。

• 補充劑的無菌性：所有培養(yǎng)基和補充劑必須無菌，必要時采用過濾滅菌。

• 個人防護裝備：在細胞培養(yǎng)實驗室中，最大限度地減少傷害依賴于嚴格遵守個人防護裝備，例如符合 EN374-3 標準的手套。

• 消毒：最大限度地減少傷害還取決于正確使用次氯酸鈉或乙醇等消毒劑。為了實驗室衛(wèi)生的全面安全性和有效性，下表詳細介紹了其他消毒劑及其具體使用案例：

 4. 培養(yǎng)環(huán)境設置

• 用于貼壁細胞系的燒瓶：經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的燒瓶通常足以容納大多數(shù)細胞系。對于需要額外支持的某些細胞類型，可以對燒瓶進行預處理或用明膠或纖連蛋白等底物包被。這些涂層可以顯著改善細胞附著和增殖。詳細的制備和包衣方案可在相應的產(chǎn)品信息表中找到。

• 用于懸浮細胞系的燒瓶：使用專為非貼壁細胞設計的燒瓶，可使其自由移動和充分的氣體交換。這些燒瓶不需要促進細胞附著的表面處理。

5. 監(jiān)測細胞健康狀況

維持細胞培養(yǎng)的健康是細胞培養(yǎng)工作的一個重要方面。持續(xù)監(jiān)測對于確保實驗結(jié)果的完整性和可重復性至關重要。以下是監(jiān)測細胞健康狀況的詳細做法：

5.1.每日檢查

• 顯微鏡評估：每天使用顯微鏡檢查細胞，評估細胞健康的關鍵指標，包括一致的細胞附著、特征形態(tài)和預期的生長模式。尋找細胞大小和形狀的均勻性、是否存在不同的細胞核以及是否缺乏可能表明細胞死亡的顆粒度。

• 生長率監(jiān)測：跟蹤增殖率，確保其與細胞系的預期倍增時間一致。生長速率的突然變化可能表明細胞健康或培養(yǎng)條件存在潛在問題。

• 培養(yǎng)基評估：檢查培養(yǎng)基的顏色，它可以指示 pH 值的變化。泛黃的培養(yǎng)基表明酸度增加，通常是細胞代謝或細菌污染的副產(chǎn)品，而紫色或粉紅色調(diào)則表明更堿性的環(huán)境。

5.2.廢棄培養(yǎng)物的標準

• 污染指標：警惕污染跡象，例如培養(yǎng)基渾濁、意外的 pH 變化或微生物菌落的存在。污染物可以是細菌、真菌或病毒，每種類型都有不同的視覺線索，例如細菌膜或真菌菌絲。

• 形態(tài)異常：如果細胞表現(xiàn)出與正常生長或分化無關的持續(xù)形態(tài)異常變化，則可能需要丟棄培養(yǎng)物。這包括廣泛的細胞變圓、脫離或細胞碎片的存在。

• 不可逆應激跡象：尋找不可逆應激或毒性的跡象，例如空泡形成、膜起泡或凋亡小體。這些通常是細胞死亡的前兆，并可能影響實驗結(jié)果。

• 生長條件退化：如果培養(yǎng)物已達到匯合或過度生長，導致營養(yǎng)耗盡和廢物積累，則應將培養(yǎng)物進行傳代培養(yǎng)或丟棄，以避免對細胞健康產(chǎn)生負面影響。

6. 傳代策略

傳代培養(yǎng)或分裂細胞是細胞培養(yǎng)的常規(guī)部分，涉及將細胞培養(yǎng)物的一部分轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中以繁殖培養(yǎng)物。仔細的規(guī)劃和執(zhí)行對于此過程的成功至關重要。以下是一些有效傳代的增強策略：

計劃分割

• 最佳分流比：根據(jù)細胞系特征、生長速率和培養(yǎng)物的預期用途確定理想分流比。對于快速生長的細胞，這可能涉及 1:2 的分割；對于生長較慢的細胞系，可能需要 1:10 的分割。

• 供應商規(guī)格：請參閱供應商的產(chǎn)品表，了解針對每個細胞系的具體建議，其中通常包括詳細的傳代培養(yǎng)方案和細胞所需的條件。

• 培養(yǎng)的連續(xù)性：維護主細胞庫并使用一致的傳代培養(yǎng)程序，以確保細胞系的壽命和遺傳穩(wěn)定性。

7. 介質(zhì)維護

及時補充營養(yǎng)：應在細胞耗盡必需營養(yǎng)之前更換培養(yǎng)基，這對于細胞的生長和代謝功能至關重要。

pH 值和毒素控制：定期改變可防止代謝副產(chǎn)物的積累并維持對細胞健康至關重要的生理 pH 值。

8. 通道數(shù)控制

傳代限制：保留細胞傳代的詳細日志。頻繁傳代會導致遺傳漂變，從而改變細胞表型和行為。通過限制傳代次數(shù)，可以保持細胞系的遺傳穩(wěn)定性和完整性。

傳代數(shù)記錄：每次細胞傳代培養(yǎng)時，記錄傳代數(shù)。該信息對于跟蹤細胞系歷史和識別細胞行為中潛在的傳代相關變化至關重要。

9. 確保細胞系完整性

• 驗證記錄：定期驗證細胞系身份（例如，通過短串聯(lián)重復（STR）分析）并在記錄中對此進行注釋，以確保在整個實驗中使用正確的細胞系。

• 突變監(jiān)測：如果可能，監(jiān)測可能表明遺傳漂變或細胞系污染的關鍵遺傳或表型變化，并保存這些記錄以供參考。